响应面优化超声提取甘草渣总黄酮工艺及抗氧化研究(一) 草渣是总黄一味常用大宗药材

  发布时间:2025-05-10 18:33:23   作者:玩站小弟   我要评论
甘草为豆科甘草属乌拉尔甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根和根茎,多生长在干旱、半干旱的草原、沙漠或丘陵地带,是一味常用大宗药材,被称为“国老”,在中医里有“十方九草& 。

甘草为豆科甘草属乌拉尔甘草、面优胀果甘草或光果甘草的化超化研干燥根和根茎,多生长在干旱、声提半干旱的取甘草原、沙漠或丘陵地带,草渣是总黄一味常用大宗药材,被称为“国老”,酮工在中医里有“十方九草”之说,艺及不仅本身具有补脾益气、抗氧清热解毒、面优祛痰止咳、化超化研缓急止痛、声提抗氧化、取甘保肝和增强记忆力的草渣功效,还在中药配伍中具有调和诸药,总黄以增加药效的作用。

目前,从甘草中分离出的化合物有400多种,其中黄酮类化合物含量最多,且生物活性较强,其因连有异戊烯基,使得其脂溶性增加,具有抗炎、抗氧化抗病毒川、抗肿瘤、抗抑郁、镇静和镇痛等功能,并对人类免疫缺陷病毒有较强的抑制增殖作用,其潜在的药用价值巨大。目前的提取方法主要有:有机溶剂提取、碱性稀醇或碱性水提取、超声提取、微波提取、超临界萃取、酶解提取等方法。其中超声提取法是不仅高效、省时、低成本,而且超声波具有空化作用、热效应和机械搅拌等作用,在提取天然物质时,对有效成分的破坏性小。

甘草渣是提取甘草酸后剩余的药渣,有研究表明其中含有大量的黄酮类物质,为了更高效的利用药材,本实验以甘草渣为研究对象,对超声辅助提取其总黄酮的工艺进行了研究,得到最优提取条件,并对其抗氧化能力进行了考察,以期对今后甘草的利用和开发提供参考。

一、实验仪器与材料

1、实验材料与试剂

无水乙醇、氢氧化钾:天津市永大化学试剂有限公司;硫酸亚铁:天津市博迪化工股份有限公司;水杨酸:天津市百世化工有限公司;双氧水:天津欧博凯化工股份公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH):日本光和纯药;维生素C:北京索莱宝科技有限公司;铁氰化钾:天津市科密欧化学试剂有限公司;三氯乙酸:天津市永大化学试剂有限公司;以上试剂均为分析纯。甘草苷:潍坊华植生物科技有限公司;甘草购于石家庄某公司。

2、仪器

KQ5200DE型超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司;SZF-06A型快速提取仪:上海新嘉电子有限公司;R201C型真空旋转蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂;TGL-10B型高速台式离心机:上海安亭科学仪器厂;UV-6000PC型紫外可见分光光度计:上海元析仪器有限公司;DZF-6050型真空干燥箱:上海博讯实业有限公司;B-260型恒温水浴锅:上海亚荣生化仪器厂。

3、方法

(1)甘草苷对照品的配置

准确称取甘草苷15mg置于25mL容量瓶中,加入70%乙醇溶液至刻度,制成浓度为0.6mg/mL的甘草苷对照品溶液,置于4℃条件下,备用。

(2)甘草渣中总黄酮的提取

取适量甘草,粉碎,过60目筛后准确称取100.0g于烧杯中,加入含0.3%氨水的60%的乙醇水溶液500mL,80℃回流提取2次,每次2h,过滤后滤渣即为甘草渣,干燥后备用。

准确称取备用甘草渣2.0g于容器中,加入70%乙醇溶液,超声处理后,在一定温度下进行回流提取。过滤后5000r/min离心10min,取上清液进行浓缩、再用70%乙醇溶液进行溶解定容至25mL即为样品溶液,置于4℃条件下,备用。

(3)总黄酮的测定

准确移取不同梯度浓度的对照品溶液于25mL的容量瓶中,加0.5mL的氢氧化钾溶液(10%),震荡使混合均匀,室温下放置10min,70%乙醇溶液定容。以70%乙醇溶液作为空白对照,在400nm处测定其吸收值。以对照品溶液的浓度为横坐标,对应的吸光度值为纵坐标,进行线性回归,得回归方程为Y=0.01799X+0.05153,R2=0.9991,结果表明在浓度为6ug/mL~60μg/mL的范围内,其浓度与吸光度呈良好的线性关系,见图1。

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移取0.8mL样品溶液于25mL的容量瓶中,重复上述操作,测得其吸收值,带入回归方程中,得出其总黄酮的含量,按照公式(1)计算收率。

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(4)单因素试验

①料液比对甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣,分别以料液比1:25(g:mL)、1:30(g:mL)、1:35(g:mL)、1:40(g:mL)和1:45(g:mL)的比例加入70%乙醇溶液,超声30min,在60℃下回流提取2h。

②超声时间对甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣,以料液比1:35(g:mL)的比例加入70%乙醇溶液,分别超声10min、20min、30min、40min、50min和60min,在60℃下回流提取2h。

③提取时间对甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣,以料液比1:35(g:mL)的比例加入70%乙醇溶液,超声40min,在60℃下分别提取lh、2h、3h和4h。

④提取温度对甘草渣总黄酮收率的影响

精确称取2.0g甘草渣,以料液比1:35(g:mL)的比例加入70%乙醇溶液,超声40min,分别在50℃、60℃、70℃、80℃和90℃下提取2h。

(5)响应面优化实验

在单因素试验的基础上,选择超声时间、提取时间和提取温度为自变量,以提取率为响应值,进行Box-Behnken响应面实验设计,每个因素取3个水平,所有实验重复3次。具体因素实验水平见表1。
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